摘要：美洲幼虫腐臭病是现在损害蜜蜂幼虫成长的首要细菌病，不合理地运用抗生素防治该病是导致蜂产品抗生素残留的重要因素。本文介绍了它的病原(Paeniballus larvae subspecieslaevae)和盛行病学特征，并就现在检测美洲幼虫腐臭病痛原和防治该病的研讨进展做一总述。
关键词：美洲幼虫腐臭病 幼虫芽孢杆菌 检测防治
美洲幼虫腐臭病(American foulbrood)，简称美幼病，是损害蜜蜂幼虫的一种细菌性病害。被感染的蜜蜂幼虫平均在孵化后12．5天体现出症状，首要体色明显变化，从正常的珍珠白变黄、淡褐色、褐色乃至黑褐色，一起虫体不断失水干瘦，最终成紧贴于巢房壁的、黑褐色的、难以铲除的鳞片状物。该病于1907年确认，现在广泛发生于温带与亚热带地区的简直一切国家，给这些国家的养蜂业带来了严峻的经济损失。我国于1929～1930年间引入日本西方蜜蜂蜂种时将该病带入，现在受其影响较严峻(陈盛禄，2001)。美洲幼虫腐臭病的病原具有极强的生命力，在从前爆发美幼病的养蜂主产区遍及存在，因而，大都蜂场为防止美幼病的发生，选用饲喂抗生素的办法，这是构成蜂产品中抗生素残留的重要因素，假如用药剂量和时刻稍不留意，就会引起抗生素残留超支。研讨美幼病的病原检测办法和防治新技能关于精确对症用药，选用非抗生素药物防治美幼病，削减或防止抗生素残留具有重要含义。
1 病原
美洲幼虫腐臭病由幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae subspecies larvae)引起。它是一种革兰氏阳性细菌，在必定条件下能发生芽孢，并且它发生的芽孢很有特征，一般细菌的芽孢外面只需4～5层结构围住，可是幼虫芽孢杆菌的芽孢却有7层结构围住，这种特别的结构使得幼虫芽孢杆菌的芽孢具有特别强的生命力，并且它对热、化学消毒剂等都具有极强的反抗力，在热、枯燥等恶劣环境下至少能存活35年。
现在已知幼虫芽孢杆菌的基因型至少有5种，且不同基因型的细菌株系所导致的美洲幼虫腐臭病的盛行状况略有不同(Genersch E 等，2003；NeuenJorf S 等，2004)。不同基因型的幼虫芽孢杆菌能够经过PCR技能和16SrRNA的编码基因的限制性酶切片段多态性加以差异判定。
2 盛行病学特征
美洲幼虫腐臭病病害的盛行是由幼虫芽孢杆菌的芽孢引起的，而不是它的养分体。原因或许是蜜蜂幼虫的食物具有必定的杀菌效果，比方花粉和蜂王浆中的一些脂肪酸和抗菌肽物质，它们对幼虫芽孢杆菌的养分体有按捺和杀灭的效果(Manning R，2001；Bililtova K 等，2001；Bachanova K 等，2002)。
芽孢被蜜蜂幼虫取食后，就在幼虫的中肠萌生，然后穿过小肠安排，开端快速繁衍，最终杀死蜜蜂幼虫。对芽孢的萌生来说，日龄越小的幼虫其萌生条件越好，但对养分成长来说，则是老熟幼虫最适合。这是因为芽孢的萌生需求一个低氧压的环境，而成长、繁衍及发生芽孢则需求高氧压的环境(陈盛禄，2001)。所以不同虫龄的蜜蜂幼虫对幼虫芽孢杆菌的灵敏性差异十分大，1日龄的幼虫对幼虫芽孢杆菌高度灵敏，一般只需缺乏10个芽孢就能使之患病，可是侵染2日龄以上的幼虫，则需求数以百计的芽孢(Evans，2004)。别的有研讨发现，成虫蜜蜂对幼虫芽孢杆菌有反抗效果，原因是它们的中肠能发生一些能够按捺幼虫芽孢杆菌成长和芽孢发育的物质。
幼虫芽孢杆菌在蜜蜂群内的传达能够是水平的，即经差错投和盗蜂传达，也能够是笔直的，即经过火蜂传达，而在群间的传达则首要是经过笔直传达(Fries I 等，2001)。幼虫芽孢杆菌的这种传达办法使得它成为蜜蜂一种传染性极强的疾病。因为芽孢只需在适合的环境下就能萌生，所以美洲幼虫腐臭病的发生没有必定的时节性，病害能在一年中的任何一个有幼虫的时节都有或许发生，可是一般在夏、秋时节发生的相对较多。气候和蜜源对其发生有必定的影响，病群在优质蜜源大流蜜期到来时，病况会减轻，有些乃至能“自愈”，其原因首要有：①芽孢或许被采进的花蜜稀释，然后降低了幼虫从食物中触摸芽孢的时机；②花蜜的充盈影响了蜂群中内勤蜂的清洁行为，内勤蜂发现和消除病虫的才能增强；②刚采回的花粉作为幼虫的食物，在必定程度上也削减了幼虫被芽孢侵染的时机(Fries I 等，2001)。
3 病原判定
关于幼虫芽孢杆菌的判定，早些时分一般先对其进行别离培育，然后进一步经过生化手法进行判定。可是因为幼虫芽孢杆菌芽孢的成长比较特别，它需求杂乱的养分，在一般培育基上不能萌生也不能构成芽孢，需求专用的培育基，并且它的成长速度很慢，所以这样的办法明显比较花时刻，并且还要依靠后边一系列杂乱的生化办法。
于是就有人企图开展一种选择性培育基，期望经过火离培育就能判定出幼虫芽孢杆菌，而不再需求接下来的生化判定。在这些探究中比较成功的是Alippi在1995年创造的一种半选择性培育基。他在培育基中加了萘啶酮酸和pipennedic酸，因为幼虫芽孢杆菌的成长比较特别，它能够在加了萘啶酮酸和pipeMedic酸的培育基上成长，而其他大大都细菌则不能，然后能够将它们别脱离。尽管这种办法相对比较简洁，可是却不可防止的存在必定的假阳性现象。在此基础上，在1999年，Govan V A 等报导能够运用PCR技能来分辩培育时呈现的真假阳性，然后增加了上述办法的可信度间。
1999年，Stahly等从NE株系的幼虫芽孢杆菌中别离得到了幼虫芽孢杆菌噬菌体的致命性突变体PPLlc，并且证明幼虫芽孢杆菌的简直一切株系都对PPLlc灵敏，而其他细菌对PPLlc有抗性。这样就使幼虫芽孢杆菌培育后的判定变得愈加简略方便了，只需看是否有噬菌斑的呈现就能够了。
可是上述这些办法的运用都需求幼虫芽孢杆菌的培育，而前面现已说到幼虫芽孢杆菌的培育是比较费事的，PCR技能的运用就克服了这一困难，它能够不需求经过培育，就能直接对蜂蜜中的芽孢进行判定。
2001年，Dobbelaere W等开展了一种以16Sr—RNA的编码基因为引物的PCR技能来判定幼虫芽孢杆菌的办法，实验证明该办法快速、牢靠，在4小时内就能做出正确的确诊。尔后，Piccini C 等(2002)、Bakonyi T 等(2003)、AlipPi A M 等(2004)也相继报导了能够运用PCR技能对蜂蜜中的芽孢进行快速直接判定。经过这些PCR技能的改善和引物的改进，现在咱们现已能够在蜜蜂幼虫没有发病的时分检测出低含量的芽孢，然后能够防患于未然，操控美洲幼虫腐臭病的大规模盛行。
4 防治
因为美洲幼虫腐臭病的存在前史现已比较悠长，并且它的传染性极强，破坏力很大，所以怎么来有用的防治它是人们一直以来都十分关怀的问题，相关的研讨报导也许多，而其间研讨最多的莫过于抗生素的运用。
早在1944年 Haseman 等就介绍用硫胺噻唑来医治美洲幼虫腐臭病，1951年 Gochnauer 等报导土霉素医治美洲幼虫腐臭病十分有用，然后的几十年人们就遍及运用土霉从来防治美洲幼虫腐臭病。可是近些年来人们越来越多的遇到了运用土霉素医治美洲幼虫腐臭病效果下降的状况，有时乃至彻底失效，后来证明是幼虫芽孢杆菌对土霉素发生了抗性。
怎么操控现已对土霉素发生了抗性的美洲幼虫腐臭病成为蜂病防治的新课题。许多人将留意力投向了运用其他的抗生从来替代土霉素。2001年，Feldlaufer M F 等报导盐酸林可霉素(lincomycin hy—drochloride)能有用地操控美洲幼虫腐臭病，并且对蜜蜂的成长没有毒性间。2002年，Elzen P 等报导泰乐菌素(tylosin)对操控有土霉素抗性的美洲幼虫腐臭病很有用，并且它对蜜蜂的成长也没有毒性。可是这些候选抗生素的发现或许会在必定时期内有用，但却不能从根本上处理问题，因为新的抗生素的运用相同还存在会使病原菌发生抗性的问题。
此外，抗生素的运用还有别的一个遍及的问题，便是抗生素会在蜂蜜中残留，然后影响蜂产品的质量。相关的研讨报导也许多，现在首要是经过HPLC—MS/MS办法来判定和丈量蜂蜜中残留的抗生素(Benetti C 等，2004；Ortelli D 等，2005)。最近，Kochansky J 报导泰乐菌素在蜂蜜中的降解很慢，它在34℃环境下转变为脱炭霉糖泰乐菌素(desmycosin)的半衰期大约是4个月，而脱炭霉糖泰乐菌素在蜂蜜中适当安稳，在处理9个月今后，两者在蜂蜜中的总量只削减了一点点。所以在运用泰乐菌从来医治美洲幼虫腐臭病必定要当心它在蜂蜜中长时刻残留的问题。
已然抗生素的运用存在上述两个很难处理的问题，所以咱们不能长时刻依靠抗生从来防治美洲幼虫腐臭病，于是就企图去寻觅其他药物和途径。2001年，Bilikova K 等报导别离自蜂王浆中的一个多肤片段能够做为按捺美洲幼虫腐臭病的潜在因子。2002年，Bachanova K 等经过多聚酰胺凝胶上细菌成长按捺实验证明了蜂王浆中的抗菌肽按捺幼虫芽孢杆菌成长的活性。2004年，Gallardo G L 等报导别离自蜂房花粉中两个真菌株系的L—细交链孢菌酮酸(L－TenuMonicacid)体现出了对幼虫芽孢杆菌成长的特别按捺才能，其最小按捺浓度为32ug/mL，比现在遍及运用的土霉素的最小按捺浓度小。2004年，Aonstein K A 等报导蒜素(Allicin)具有按捺幼虫芽孢杆菌成长的潜力，能在必定程度上削减美洲幼虫腐臭病的发生。
除了运用药物外，还能够辅佐运用其他一些途径。2001年，Del Hoyo M L 等就报导经过转移感染美洲幼虫腐臭病的蜂群到新的蜂场能够削减其芽孢的带着量。同年，Spivak M等报导有卫生行为的蜂群抵抗美洲幼虫腐臭病有很大效果，有卫生行为的蜂群感染美洲幼虫腐臭病的机率相对较小，而康复的机率则相对较大，并且发生蜂蜜的量也相对较多。
5 展望
跟着幼虫芽孢杆菌对土霉素抗性的日益增强，迫切需求寻觅新的药物来替代，或许选用有用的养殖办理和育种技能来操控美幼病的发生。尽管相关的研讨比较多，可是到现在为止还未得到咱们遍及公认的安全高效的抗菌药物，土霉素仍然是现在广阔蜂农遍及运用的抗菌药。所以怎么有用地筛选出安全高效的蜂用抗菌药物，并研讨出其最佳的用药时刻、用药剂量、用药办法，然后拟定出一套科学的标准的计划对生产实践具有重要的含义。别的，因为中草药在我国的共同位置，加上它长时刻运用不会发生抗性的优秀特性，咱们能够尝试着寻觅有用的中草药来防治美洲幼虫腐臭病。
引自《我国蜂业》2007（8）
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